Podstawowa zasada syntezy DNA

Chemiczna synteza DNA opiera się na strategii syntezy w fazie stałej i chemii amidofosforynów.W odróżnieniu od biologicznej syntezy DNA, materiałem w chemicznej syntezie DNA jest DMT (4,4-dimetoksytrityl) i deoksyryboksyzyd modyfikowany fosforamidytem, ​​jak pokazano na rysunku 1. Synteza DNA odbywa się na stałym podłożu (możemy zaoferować różneKolumna do syntezy oligo), czyli CPG (szkło o kontrolowanej porowatości) i PS (polistyren), a cała synteza odbywa się naSyntezator DNA/RNA, który jest naszym głównym sprzętem, ma inny model, taki jak: syntezator jednokanałowy HY, HY-12, HY-192 itp., kierunek syntezy wynosi od 3 'do 5', a nukleotyd jest wprowadzany do stałego nośnika przez jeden cykl syntezy.Typowy cykl syntezy obejmuje cztery etapy: odbezpieczanie, sprzęganie, zamykanie i utlenianie (rysunek 2).Odbezpieczanie ustawiono tak, aby usunąć grupę DMT na stałym nośniku lub grupę 5' hydroksylową poprzedniego nukleozydu. Jako odczynnik odbezpieczający stosuje się 3% kwas trichlorooctowy w dichlorometanie.Następnie pozwolono zmodyfikowanemu fosforoamidytem dezoksyryboksyzydowi na odsłonięcie grupy hydroksylowej za pomocą aktywatora, tj. 5-etylotiotetrazolu lub 4,5-dicyjanoimidazolu, tworząc fosforynotriester (III) i przeprowadzono etap sprzęgania.Etap zamykania prowadzi się w celu zablokowania nieprzereagowanej grupy hydroksylowej podczas etapu sprzęgania i zminimalizowania tworzenia niepożądanych sekwencji defektów.Na koniec niestabilny fosforynotriester (III) utlenia się do chemicznie stabilnego fosforotriestru (V) za pomocą jodu jako utleniacza w obecności pirydyny.

Zsyntetyzowany DNA można odszczepić od stałego nośnika za pomocą aminolizy, grupa zabezpieczona 2-cyjanoetylem na fosfortriestrze i amid na zasadzie nukleinowej jest odszczepiana w tym samym czasie, płytki do syntezy i kolumny do syntezy na stojakach umieszcza się bezpośrednio w komorze reakcyjnej zSprzęt do usuwania zabezpieczeń.Na żądanie surowe DNA można przygotować za pomocą HPLC, elektroforezy i OPC, możemy również je zapewnićSprzęt do oczyszczaniado obróbki końcowej.